كلية الزراعة

تاريخ التسجيل : 03/09/2011

6-2-2-3 اختبار التحري عن إنزيم الكاتاليز Catalase test

أجري هذا الاختبار للتحري عن قابلية
العزلات على إنتاج إنزيم الكاتاليز الذي يشطر بيروكسيد الهيدروجين (H₂O₂) السام إلى
غاز الأوكسجين والماء.

أجري الاختبار بنقل جزء من
المستعمرة الجرثومية المأخوذة من مزرعة فتية باستعمال الناقل (Loop) ووضعها على شريحة زجاجية نظيفة ومن ثم أضيفت
إليها بضع قطرات من محلول بيروكسيد الهيدروجين%3، يعد ظهور فقاعات هوائية خلال ثواني قليلة من إضافة الكاشف نتيجة
موجبة للاختبار.

استعملت السيطرة السالبة من مزج
المستعمرة الجرثومية مع المحلول الملحي
الفسلجي على شريحة زجاجية.

7-2-2-3 اختبار
الحركة Motility test

لقح وسط اختبار الحركة بمستعمرات
فتية من العزلات الجرثومية بطريقة الطعن باستعمال الإبرة (Needle) وحضنت الأنابيب الملقحة بدرجة حرارة 37 درجة مئوية مدة 24 ساعة، يعد ظهور تضبب أو عكارة حول منطقة
الطعن نتيجة موجبة للاختبار.

8-2-2-3 اختبار
التحري عن إنزيم محلل اليوريا Urease test

لقح مائل غراء اليوريا (Urea agar) بطريقة الطعن بمستعمرات فتية من العزلات
الجرثومية وحضنت المستنبتات بدرجة حرارة 37 درجة مئوية مدة 24 ساعة، يعد تغير اللون من الأصفر إلى الوردي
نتيجة موجبة للاختبار..

9-2-2-3 اختبار
استهلاك السترات Citrate
utilization test

أجري هذا الاختبار للتميز بين
الأجناس والأنواع الجرثومية التي لها القابلية على استهلاك السترات كمصدر كاربوني
وحيد وتلك التي ليس لها مثل هذه القابلية وقد استعمل لهذا الغرض وسط غراء سترات
سيمون إذ لقح الوسط بمستعمرة
فتية بطريقة الطعن وحضنت المستنبتات بدرجة حرارة 37 درجة مئوية مدة (24 – 18) ساعة. يعد
تغير لون الوسط من الأخضر إلى الأزرق دليل على إيجابية الاختبار..

10-2-2-3 اختبار
الاندول Indole
test

أجري هذا الاختبار للتحري عن قابلية
العزلات على تحويل الحامض الامينـي تربتوفان إلى اندول ، إذ لقح ماء الببتون بمسـتعمرة فتية من العزلة الجرثوميـة وحضن بدرجة
حرارة 37 درجة مئوية
مـدة (96 – 24) ساعة وتمت
قراءة النتائج بعد انتهاء مدة الحضن بإضافة بضع قطرات من كاشف كوفاكس يعد ظهور حلقة
حمراء في أعلى المزروع الجرثومي نتيجة موجبة للاختبار.

11-2-2-3 اختبار
الميثل الأحمر Methyl red test

أجري هذا الاختبار للتحري عن مسلك
التخمر مختلط الحوامض (Mixed acid fermentation path) إذ يؤدي هذا المسلك التخمري إلى تجمع الحوامض المختلفة في الوسط
الزرعي مما يؤدي إلى خفض الرقم الهيدروجيني للوسط. لقح وسط (MR-VP)بمستعمرات فتيـة من العـزلات الجرثومية وحضنت المستنبتات
بدرجة حرارة 37 درجة مئوية
مدة (48 – 24) ساعة وبعد
انتهاء مدة الحضانـة أضيفت بضع قطرات من كاشف المثيل الأحمر (Methyl red)، يعد تغير لون الوسط إلى الأحمر نتيجة موجبة
للاختبار.

12-2-2-3 اختبار
فوكس-بروسكاور

Vogas-proskauer (VP) or Acetoine production test

تم التحري بوساطة هذا الاختيار عن
أحد مسارات التخمر لسكر الكلوكوز الذي يكون فيه الاسيتوين هو ناتج للتخمر. أجري الاختبار بتلقيح وسط الـ MR-VP بمستعرة فتية من العزلات الجرثومية وتمت حضانة المستنبتات بدرجة
حرارة 37 درجة مئوية
مدة (48 -24) ساعة وبعد
انتهاء مدة الحضانة أضيف لكل أنبوبة 1 ملليتر من %40 هيدروكسيد البوتاسيوم و3 ملليتر من مع الرج. يعد ظهور لون
وردي نتيجة موجبة للاختبار.

13-2-2-3 اختبار تميع
الجيلاتين Gelatin
liquefaction test

أجري هذا الاختبار للتحري عن إنتاج العزلات الجرثومية
لإنزيم Gelatinase. تم تلقيح
وسط الجيلاتين بمستعمرات فتية من العزلات الجرثومية بطريقة الطعن بالإبرة وتمت
حضانة المستنبتات بدرجة حرارة37 درجة مئوية
مدة 24 ساعة إلى 7 أيام، وبعد انتهاء مدة الحضانة وضعت
الأنابيب في الثلاجة بدرجة حرارة 4 درجة مئوية
مدة 30 دقيقة. أن
تحول الجيلاتين من القوام الصلب إلى السائل يعد دليلاً على إيجابية الاختبار

14-2-2-3 اختبار تخمر
السكريات Carbohydrate
fermentation test

لقحت أوساط تخمر السكريات بمستعمرات فتية من العزلات
الجرثومية ثم حضنت بدرجة حرارة 37 درجة مئوية
مدة 24 ساعة، أن
تغير لون الوسط من الأحمر إلى الأصفر وارتفاع أنبوب درهم وامتلاءه بالهواء دليل
على إيجابية الاختبار.

3-2-2-3 شكل النمو
على وسط غراء الزايلوز لايسين دوكسي كوليت (XLDA)

أعيد استنبات العزلات على وسط غراء الزايلوز لايسين ديوكسي كوليت وحضنت الأطباق هوائياً بدرجة حرارة 37 درجة مئوية مدة (48 – 24) ساعة، لوحظ بعدها شكل النمو إذ يحتوي هذا
الوسط على سكر الزايلوز والحامض الاميني اللايسين وأملاح الصفراء الأمر الذي جعله
وسطاً تفريقياً انتقائياً في الوقت نفسه، إذ يتم من خلاله التحري عن قابلية
الجراثيم على تخمير سكر الزايلوز وإزالة مجموعة الكاربوكسيل من الحامض الأميني
لايسين ناهيك عن اختبار قابلية العزلات على النمو في وسط يحتوي على أملاح الصفراء
بوصفها مثبطة لنمو بعض الأنواع الجرثومية. فضلاً عن ذلك من خلال هذا الوسط يجري
التحري عن إنتاج غاز كبريتيد الهيدروجين H₂S من بعض الأنواع الجرثومية.

4-2-2-3 تنمية
العزلات في وسط ثلاثي السكر والحديد(TSI)

لقح مائل وسط ثلاثي السكر والحديد
بطريقة الطعن Stabbing ثم التخطيط Streaking على سطح المائل من مرق مزرعة جرثومية بعمر (24 – 18) ساعة، وحضنت المستنبتات مدة 24 ساعة بدرجة حرارة 37 درجة مئوية. لوحظت النتائج من خلال تغيير لون الوسط في القعر والمائل
وكذلك تكوين الفقاعات الهوائية أو تكسر الهلام وإنتاج غاز كبريتيد الهيدروجين.

3 الاوساط Media

2-1- 3-A الأوساط الزرعية البكتيرية Bacteriological culture media

عقمت الأوساط الزرعية بالمؤصـدة
بدرجة 121م وتحت ضغط 15 باوند/أنج² لمدة 15 دقيقة فيما
عدا بعض الأوساط المشار إليها.

1-A-2-1-3 وسط غراء
الماكونكي ((Himedia) (MacConkey agar

حضر بحسب تعليمات الشركة المجهزة،
وعقم بالموصدة وترك ليبرد إلى درجة 50درجة
مئوي وتم صبه في أطباق بتري نظيفة ومعقمة، استعمل هذا الوسط لعزل الجراثيم السالبة
لملون غرام وتشخيصها من حيث اختبار قابليتها على تخمير سكر اللاكتوز. (Collee et al, 1996).

2-A-2-1-3 وسط غراء
الدم Blood
agar)) (Himedia)

حضر هذا الوسط بإضافة %5 من دم الإنسـان إلى وسـط غراء الدم الأساس (Blood agar base) المعقم
بالموصدة والمبرد إلى حوالي (50 – 45ْ) درجة مئوية (MacFaddin, 2000) وصب في حال تحضيره في أطباق
بتري نظيفة ومعقمة، استعمل هذا الوسط كوسط عزل عام للعزلات من العينات السريرية
ولمعرفة نوع تحلل الدم.

3-A-2-1-3 وسط الغراء
المغذي ((Himedia) (Nutrient agar

حضر بحسب
تعليمات الشركة المجهزة، وتم تعقيمه وصبه في اطباق بتري نظيفة ومعقمة. استعمل هذا
الوسط لاغناء العزلات الجرثومية أثناء العمل .

4-A-2-1-3 وسط غراء ثلاثي السكر والحديد
(Himedia) (Triple sugar iron agar)

حضر على وفق تعليمات الشركة
المجهزة،وعقم بالموصدة , وبعد انتهاء مدة التعقيم ترك الوسط ليبرد الى درجة حرارة 50 درجة مئوية ثم صب في انابيب بلاستيكية (Afma tube) وبواقع 5مليلتر
لكل انبوبة وضعت الأنابيب بشكل مائل وتركت لتتصلب. حفظت
هذه الأنابيب بدرجة 4م لحين
الاستعمال.استعمل وسط غراء ثلاثي السكر والحديد لاختبار قابلية العزلات الجرثومية
على تخمير الكلوكوز واللاكتوز والسكروز وإنتاج غاز كبريتيد الهيدروجين (H₂S) وثاني أوكسيد الكاربون ( Forbes et al., 2007).

5-A-2-1-3 وسط غراء الزايلوز لايسين ديوكسي كوليت

(Xylose lysine
deoxycholate agar)(XLD) (Himedia)

حضر على وفق تعليمات الشركة
المجهزة، وتم تعقيمه بالتسخين إلى درجة الغليان مع الرج المستمر، نقل بعدها إلى
حمام مائي بدرجة حرارة 50 درجة مئوية من
ثم تم صبه في أطباق بتري نظيفة ومعقمة.

استعمل هذا الوسط لاختبار قابلية
العزلات الجرثومية على تخمير سكر الزايلوز وكذلك سحب مجموعة الكاربوكسيل (COO^-) من الحامض الاميني لايسين (Lysine) وأيضاً إنتاج غاز H₂S. Forbes et al.,2007) )

6-A-2-1-3 وسط غراء
اليوريا ((Urea agar

حضر 950 ملليتر من وسط غراء اليوريا الأساس (Oxoid)
(Urea agar base) على وفق تعليمات الشركة المجهزة، وعقم
بالموصدة، بعدها ترك ليبرد إلى درجة حرارة 45 درجة مئوية إذ تمت إضافة 50 ملليتر من محلول %40 يوريا معقم
بالترشيح بوساطة أغشية الترشيح الدقيقة بقطر ثقوب0.22 مايكروميتر (Millipore Whatman 0.22 Mm).

وتم صب الوسط الكامل في أنابيب بلاستيكية وبواقع
5 ملليتر لكل
أنبوبة وتركت الأنابيب بشكل مائل للحصول على مائل غراء اليوريا بعد التصلب. استعمل
هذا الوسط للتحري عن قابلية العزلات الجرثومية على إنتاج إنزيم اليوريز (Urease) الذي يحلل اليوريا إلى أمونيا وثاني أوكسيد
الكاربون (Forbes et al.,2007).

7-A-2-1-3 وسط الحركة (Motility medium)

حضر 100 ملليتر من
المرق المغذي (Nutrient broth) بحسب
تعليمات الشركة المجهزة (Himedia) وأضيف إليه 0.4 غم من مسحوق الاغار (Himedia) (Agar-agar) وعقم
بالموصدة وبعد انتهاء مدة التعقيم ترك
الوسط ليبرد ثم وزع في أنابيب بلاستيكية بواقع 5 ملليتر للأنبوبة الواحدة ، بعدها ترك الوسط ليتصلب بوضع عمودي، استعمل
الوسط لاختبار قابلية العزلات الجرثومية على الحركة. (Forbes
et al .,2007)

9-A-2-1-3
وسط
أحمر المثيل – فوكس بروسكور

(Methyl red-vogas proskauer medium) (MR-VP
medium) (Himedia)

حضر بحسب تعليمات الشركة المجهزة
وعقم بالمؤصدة وبعد انتهاء مدة التعقيم
ترك الوسط ليبرد ووزع في أنابيب بلاستيكية بواقع 5 ملليتر للأنبوبة الواحدة ، استعمل هذا الوسط للتحري عن قابلية
الجراثيم على تخمير السكر بمسلك الحوامض الخليطة (Mixed acid
fermentation) وكذلك إنتاج الاسيتوين (Acetoine) (Forbes et al.,2007) .

10-A-2-1-3 وسط غراء
سترات سيمون (Simmon’s citrate agar) (Himedia)

حضر على وفق تعليمات الشركة
المجهزة، وعقم بالمؤصدة وبعد انتهاء مدة التعقيم ترك الوسط
ليبرد ووزع في أنابيب بلاستيكية بواقع 5 ملليتر للأنبوبة الواحدة، بعدها تركت بشكل
مائل لتتصلب . استعمل هذا الوسط لمعرفة قابلية العزلات الجرثومية على استخدام
السترات كمصدر وحيد للكاربون (Forbes et al ., 2007) .

12-A-2-1-3 وسط تخمر
السكريات ((Sugar
fermentation medium

حضر على وفق MacFaddin
, 2000)) من المواد الآتية:

(ببتون (Himedia) Peptone بتركيز 1%
وكلوريد الصوديوم (BDH) (NaCl) بتركيز 0.5%
وأحمر الفينول (BDH) (Phenol red) بتركيز
0.0018%).

أذيبت هذه المواد في كمية من الماء
المقطر وأكمل الحجم إلى لتر بالماء المقطر وتم ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.2 ووزع الوسط في أنابيب زجاجية بواقع 5 ملليتر للأنبوبة الواحدة مع وضع أنبوبة درهم
(Derhum tube) المقلوبة،
عقمت الأنابيب بالموصدة وعند انتهاء التعقيم تركت لتبرد وأضيف إليها السكريات
المعقمة بالترشيح بوساطة أغشية الترشيح الدقيقة بقطر ثقوب0.22 مايكروميتر بتركيز نهائي %1.

13-A-2-1-3 وسط مثيل
الايوسين الازرق Eosin methylene blue medium (EMB)

حضر على وفق تعليمات الشركة
المجهزة، وعقم بالموصدة وتم صبه في أطباق بتري لحين الاستعمال .استخدم هذا الوسط
لغرض تفريق جراثيم E.coli (Forbes et al.,2007).

» اختبارات جودة اللبن قبل القيام بعملية التسويق

كلية الزراعة

قسم صناعات الأغذية

بعض اختبارات البيوكيمكال والبيئات ....ميكروبيولوجي

بعض اختبارات البيوكيمكال والبيئات ....ميكروبيولوجي

مواضيع مماثلة

مواضيع مماثلة

نبذه تعريفيه

روابط اعلانية

روابط اعلانية

روابط اعلانية

روابط اعلانية