الصبغات الميكروبية MICROBIAL
STAINS
إن
أغلب دراسات الأحياء الدقيقة- لتحديد أشكالها العامة أو أجزائها المختلفة – تتم
على عينات مصبوغة. ويقصد بعملية الصبغ هذه تلوين الكائنات الحية الدقيقة بصبغات
خاصة لتحديد أجزائها المختلفة كالأسواط
,والجراثيم
الداخلية ,الغلاف وغيرها.
وقبل
الحديث عن أنواع الصبغات , نعطي تعريفا مبسطا للصبغة.هي مادة ملونة عضوية لها
القدرة على الالتحام مع المواد الأخرى معطية لها اللون .
والصبغات
إما أن تكون طبيعية وهي التي تنتج طبيعياً , ويمكن استخلاصها من أنسجة النباتات ,
ومن أمثلتها صبغة الهيماتوكسيلين , وإما أن تكون صناعية وهي التي تستخدم حالياً
بكثرة وتستخلص من قطران الفحم .
وسنتطرق
هنا إلى بعض أنواع الصبغات الأكثر استخداما في مجال الدراسات الميكروبية .
أولاً-
الصبغات البسيطة Simple stain
يقصد
بالصبغ البسيط استخدام صبغة واحدة فقط في صبغ الغشاء البكتيري , ومن أشهر الصبغات
المستعملة فيها صبغة ازرق الميثلين , السفرانين , النسيان البنفسجي , الفوكسين .
ثانياً-
الصبغ التفريقي Differential stain
ويقصد
به إستخدام المزايا أكثر من صبغة واحدة , وذلك للتمييز بين مجموعات بكتيرية مختلفة
, أو للتمييز بين بعض أجزاء ومكونات الخلية البكتيرية نفسها , ومن أشهر الصبغات
التفاضلية , صبغة جرام , الصبغة السالبة للكبسولة , صبغة الجراثيم , صبغة الأسواط
, الصبغة الصامدة للأحماض .
المزايا
الرئيسية للصبغ :
1. توفير التباين
بين الكائنات الدقيقة وبين الخلفية الموجودة فيها , مما يسمح بالتمييز بين الصفات
المرفلوجية المختلفة .
2. تسهيل دراسات
التركيبات الداخلية للخلايا البكترية , مثل جدار الخلية , الفجوات , الأجسام
النووية .
عمل شريحة بصبغة جرام :
1. نعقم تعقيم فيزيائي كيميائي (غسل الشريحة ومن ثم
تجفيفها بتمريرها على اللهب)
2. نضع نقطة ماء لتحطيم الغشاء
3. نعقم الإبر ونأخذ مسحة من المستعمرة.
4. نضع ونفرد المسحة على الشريحة وهذا يسمى عمل
غشاء.
5. نمرر الشريحة على اللهب حتى يجف الماء وهذا يسمى
تثبيت الغشاء.
6. نغمر الشريحة في صبغة كريستال البنفسجية لمدة
دقيقة واحدة حتى نصبغ الغشاء.
7. نغسل الشريحة حيدا بالماء حتى يزول اللون
البنفسجي
8. نضع الشريحة في اليود لمدة دقيقة واحدة ( يعتبر
مرسخ للصبغة)
9. ثم نغسل بالماء.
10.ثم نغسل الشريحة
بالكحل جدا إمالة الشريحة حتى تزول الصبغة :الكحول عامل مزيل للون الصبغة.
11. نغسل بالماء
12. نضع الشريحة على
الصفرانين : وهي الصبغة المضادة.
13. نغسل بالماء.
14. نجفف بورق الترشيح
بالضغط.
15. نجفف على اللهب حتى
تجف تماما.
16. نضع نقطة من زيت
السدر.
17. نفحص على ميكروسكوب
على 10 حتى نرى الغشاء ثم 100عدسة زيتية بطريقة ملاصقة للعدسة.
معلومة :
أن البكتيريا السالبة
لصبغة جرام تظل باستمرار سالبة لهذه الصبغة, إلا أن البكتيريا الموجبة يمكنها
تحت ظروف خاصة أن تفقد
ايجابيتها لبعض الأسباب التالية :
1. عندما تتقدم الخلايا في
العمر
2. عند ارتفاع حموضة
البيئة
3. عند المعاملة بإنزيم Ribowclease
4. إذا سحقت الخلايا مع
برادة الزجاج لتكسير جدرها فإن بقايا الخلايا المهشمة تفقد إيجابيتها.
الإثنين مارس 27, 2017 4:28 pm
نبذه تعريفيه
ضع رابطك هنا