وهي عبارة عن طريقة تسحيحية سهلة وسريعة يمكن
استعمالها للتقديرات التقريبية للبروتين





أساس الطريقة:-


يعتمد أساس هذه الطريقة على السلوك المتذبذب
للأحماض الأمينية نظرا لاحتوائها على مجموعة قاعدية وأخرى حمضية وبالتالي فيسلك
سلوك الحمض والقاعدة. وإضافة الفورمالدهيد إلى محلول يحتوي على البروتين فإنه
يرتبط بمجموعة الالفا أمين NH₂ وهي الموجودة فقط في إحدى نهايتي السلسلة
الببتيدية أو مجاميع الأمين التي تبرز من جوانب السلسلة الببتيدية( مجاميع أمين
أخرى).


ونتيجة لهذا الارتباط
تتحرر أيونات الهيدروجين من مجموعة الأمين إلى المحلول فترتفع حموضة الوسط .















إن مقدار الارتفاع في الحموضة يتناسب مع عدد
مجاميع الأمين فكلما كانت الحموضة أكثر دل ذلك على إرتفاع عدد من هذه المجاميع في
المحلول وهذا دليل على إرتفاع كمية البروتين.


إن تقدير الحموضة
الزائدة يكون عن طريق تسحيحها مع قاعدة معلومة التركيز ثم تستخرج نسبة البروتين
بضرب حجم القاعدة بمعامل معين





ملخص الطريقة:-


يتم إجراء القياس على مرحلتين:


في المرحلة الأولى :


يجرى تسحيح عينة الحليب مع NaOH حتى يتغير لون دليل phph
إلى الوردي وبهذا التسحيح نتخلص من الحموضة الطبيعية للحليب .


في المرحلة الثانية :


يضاف الفورمالين الذي يحتوي على (الفورمالدهيد
) فيلاحظ اختفاء اللون الوردي مما يدل على إرتفاع حموضة الحليب بسبب تحرر H⁺ من البروتين فيجرى التسحيح
مرة أخرى حتى ظهور اللون الوردي من جديد.


ويكون حجم القاعدة من هيدروكسيد الصوديوم في
التسحيح الأخير هو المهم في حساب نسبة البروتين من القانون الخاص .





الأدوات : Apparatus





سحاحة , ماصة
حجم 10 مل , دورق مخروطي , ماصة1 مل .





المواد الكيميائية Reagents





فورمالين ( 40%
فورمالدهيد ) , أكسالات البوتاسيوم المتعادل المشبع ,0.1N NaOH


دليل phph .














طريقة العمل Method





1.
خذ 10
ml من الحليب
وضعها في دورق مخروطي صغير ثم أضف غليها 0.5 ml من
دليل phph .


2.
أضف 0.4 ml من محلول أكسالات البوتاسيوم المشبع ويترك الدورق لمدة دقيقتين


3.
سحح مع محلول NaOH
(0.1 N )
حتى نقطة التعادل وهنا أحسب كمية NaOH
النازل.


4.
أعمل في دورق أخر نموذج ( Blank ) مع الماء وذلك بوضع 10 ml
ماء مقطر و0.5 ml phph و 2 ml فورمالين و0.4 ml أكسالات كالسيوم
ويسحح مع NaOH ثم أحسب الحجم النازل .


5.
أحسب نسبة البروتين في الحليب





الحسابات:-





النسبة المئوية للبروتين الكلي ( تقريبا ) =


حجمNaOH المستخدمة مع العينة – حجمNaOH المستخدمة مع البلانك × معاملالفورمول





المعامل يختلف باختلاف الحالة ونوع الحليب:





حليب الأبقار


1.
في حالة استخدام أكسالات البوتاسيوم يكون المعامل = 1.7 لتقدير البروتين الكلي .


2.
في حالة عدم إستخدام أكسالات البوتاسيوم يكون المعامل
= 1.95 لتقدير البروتين الكلي .


3.
في حالة إستخدام
أكسالات البوتاسيوم يكون المعامل = 1.36
لتقدير نسبة الكازين البقري .


4.
في حالة عدم
إستخدام أكسالات البوتاسيوم يكون المعامل =1.47 لتقدير نسبة الكازين
البقري .





حليب الجاموس


1.
( البروتين الكلي ) في حالة إستخدام الأكسالات = 1.66


2.
الكازين في حالة عدم إستخدام الأكسالات = 1.42

شكراً على المعلومات الرائعه