كلية الزراعة

تاريخ التسجيل : 03/09/2011

ELISA

Enzyme Linked
Immunosorbent

Assay

التحاليل
المناعية المرتبطة

v
تقنية الاليزا Clip_image002

تعريفات عامة

§
ما هي الأجسام المضادة Antibody

هي
مركبات موجودة ضمن الجهاز المناعي للجسم وتصنع بشكل خاص عند تعرض الجسم لأجسام
غريبة

l
Antigen

هو جسم
مسؤول عن إثارة الجهاز المناعي للجسم وبالتحديد إثارة الأجسام المضادة .

l
التحاليل المناعية Immunoassay

هي اختبارات بيوكيميائية لقياس مستوى
مادة معينة في السائل الحيوي

(سيرم,
بول,لعاب, دموع) بواسطة ارتباط Antigen مع Antibody المخصص له.

l
Analyte

تقنية الاليزا Clip_image004

هي المادة الحيوكيميائية
التي يتم قياسها وفي التحاليل المناعية يكون Analyte إما Antibody
أو antigen

حالات Antigen

يكون Antigen
إما:

l
موجود في الجسم بشكل طبيعي مثل الهرمونات.

l
يتم تصنيعه في الجسم في حالات مرضية مثال: هرمونHCG الذي
يفرز من خلايا المشيمة بشكل طبيعي أثناء الحمل,كما يمكن إفرازه في بعض أنواع
السرطانات حتى عند الرجال.

غير
موجود في الأحوال العادية مثل المخدرات.

مقدمة

l
يتم تصنيع الأجسام المضادة Antibodies في حال التعرض لأجسام غريبة Antigensوتكون هذه الأجسام المضادة ذات تخصصية والفة Specific Affinity
للأجسام الغريبة التي أثارت تصنيعها.

l
تتعرف الأجسام المضادة على الجزءantigenic determinant .

تقنية الاليزا Clip_image006

طرق تصنيع الأجسام المضادة الخاصة بالتحاليل المناعية

هناك
أكثر من طريقة لتصنيع الأجسام المضادة و أحد أكثر هذه الطرق شيوعا لتصنيع Antibody
مخصص لجسم ما (Antigen)هو حقن هذا الجسم لحيوان وبعد ذلك يتم استخلاص Antibody المطلوب
من سيرم هذا الحيوان.

ولكن هذا
Antibody
يسمى polyclonal لأنه ناتج تصنيع عدة خلايا.

تقنية الاليزا Clip_image008

هناك طريقة لتصنيع Antibody أكثر تخصصا monoclonal Antibody وهو ناتج تصنيع
مجموعة خلايا متماثلة
تماما cell
line ونحصل على هذه الخلايا بدمج خلية مصنعة للجسم المضاد مع خلية
سرطانية لها القدرة على الانقسام إلى مالا نهاية.

ما هي تقنية ELISA

هذه
التقنية تستخدم لقياس تركيز مادة جزيئية مثل الهرمونات والعقاقير في السائل الحيوي
كالسيرم . هذه المادة الجزيئية تقاس عن طريق معرفة كمية الأجسام المضادة Antibody
التي ارتبطت ب Antigen.

تنقسم
إلى:

1- قياسات مناعية تنافسية Competitive ELISA

2-
قياسات مناعية غير تنافسية Sandwich ELISA

وتسمى أيضا قياسات مناعية مباشرة Direct ELISA

3-
قياسات مناعية غير مباشرة Indirect ELISA

Competitive ELISA

تقنية الاليزا Clip_image010

في هذه الحالة يتنافس Antigen المطلوب قياسه في العينة معLabeled Antigen للارتباط بالجسم المضاد وفي هذه الحالة تكون
العلاقة عكسية بين كمية Antigen المطلوب قياسه مع labeled Antigen
.

Sandwich ELISA

يكون
المطلوب الكشف عن Antigen وقياس
تركيزه في العينة فيكون طبق الاليزا مغطى
بالجسم المضاد Antibody .

1- يرتبط Antigen في العينة مع الجسم المضاد .

2- يتم غسل الطبق لإزالة الأجسام المضادة غير
المرتبطة .

تقنية الاليزا Clip_image012

3-وبعد ذلك تتم إضافة أجسام مضادة أخرى وتكون هذه الأجسام المضادة
مرتبطة بإنزيم .

4- يتم
غسل الطبق أيضا لإزالة الأجسام المضادة
غير المرتبطة.

5- ثم تضاف المادة الأساس للإنزيم ويتم حساب
كمية Antigen
عن طريق قياس كمية ناتج التفاعل4.

Indirect ELISA

عندما
يكون المطلوب الكشف عن Antibody وقياس تركيزه في العينة ففي هذه الحالة:

1- يضافAntigen المخصوص لطبق
الاليزا ويترك فترة حتى يلتصق.

تقنية الاليزا Clip_image014

2- يضاف السيرم المحتوى على أنواع مختلفة من Antibody
تسمى primary
Antibody.

3- يرتبط
Antibody
في السيرم مع Antigen الموجود في الطبق .

4- يتم غسل الطبق لإزالة Antibody غير المرتبط.

5- يضاف Antibody آخر مرتبط بإنزيم Secondary Antibody وهذا يمكنه الإرتباط فقط في حال ارتباط Primary Antibody
بالعينة الموجودة في الطبق.

6- يتم
غسل الطبق لإزالة Antibody غير
المرتبط.

7-تضاف المادة الأساس للإنزيم ويتم حساب كمية Antibody عن طريق قياس كمية ناتج التفاعل.

تقنية الاليزا Clip_image016

مثال على طريقة عمل ELISA

قبل
الشروع في العمل يجب قراءة التعليمات بدقة شديدة لأن أي خطأ قد يؤدي الى فساد التجربة وخسارة قيمة Kit وهي مكلفة جدا

نستخدم Kit (مجموعة المحاليل المستخدمة في التحاليل
المناعية ) حيث أن لكل جسم مطلوب الكشف عنه Kit مخصوص.

1-
يتم ترقيم الطبق الخاص المكون من
96 خانة (wells ) بدقة وتستخدم الخانات wells
الأولى لرسم المنحنى القياسي Standard curve

2- ثم يتم وضع العينة المراد فحصها في الطبق
ويفضل تكرار كل عينة مرتين أو ثلاث مرات Duplicate or Triplicate
وبعد ظهور النتائج يؤخذ المتوسط

3-
تستخدم عينة ضابطة Quality control sample وهذه العينة تأتي مع
Kit (مجموعة المحاليل ) وهي ذات تركيز محدد من قبل
الشركة المصنعة وتعامل تماما مثل العينة المفحوصة. تقنية الاليزا Clip_image018

النتائج

تقنية الاليزا Clip_image020

بعد قراءة نتائج الإمتصاص في جهاز قارئ الاليزا نقوم برسم المنحنى
القياسي على ورق الرسم البياني بحيث نستخدم المحور السيني x-axisللتركيز concentration والمحور
الصادي y-axis للإمتصاص
Absorption .

نقوم
بتحديد تركيزات المحاليل القياسية
standards
على المنحنى السيني x-axis ثم نحدد قراءة كل محلول قياسي على المنحنى الصادي y-axis ونرسم المنحنى القياسي.

تقنية الاليزا Clip_image022

يستخدم هذا المنحنى لقياس تركيز كل عينة بحيث نأتي عند قراءة الإمتصاص
على المحور الصادي ونحدد النقطة المقابلة
لها على المنحنى وبعد ذلك نحدد التركيز
على المنحنى السيني.

نحسب تركيز العينة الضابطة من المنحنى
وإذا كان في الحدود الطبيعية المحددة من الشركة المصنعة فهذا يعني أن التجربة
ناجحة ويمكن اعتماد النتائج.

l http://www.edumedia-sciences.com/en/a543-direct-enzyme-linked-immunosorbent-assay-elisa

l ELISA

l http://www.sumanasinc.com/webcontent/animations/content/ELISA.html

l http://www.biology.ualberta.ca/facilities/multimedia/uploads/procedures/elisa-sound.swf

تقنية الاليزا Clip_image024

تاريخ التسجيل : 02/05/2011

woOoOow nice keep on تقنية الاليزا 3539032470

تاريخ التسجيل : 03/09/2011

كلية الزراعة

قسم صناعات الأغذية

تقنية الاليزا

تقنية الاليزا

نبذه تعريفيه

روابط اعلانية

روابط اعلانية

روابط اعلانية

روابط اعلانية